Note ABES Analysis of transcription factor and histone modification dynamics in the nucleus of single living cells using a novel antibody-based imaging approach Analyse en cellule unique vivante de la dynamique des facteurs de transcription et des modifications d’histone en utilisant une nouvelle approche d’imagerie fondée sur l’utilisation d’anticorps Livraison d’anticorps Imagerie sur cellules vivantes Cellules individuelles Protéine endogènes Modifications post-traductionnelles Transcription par ARN Polymérase II Antibody delivery Live-imaging Single cells Endogenous proteins Posttranslational modifications RNA Polymerase II transcription 572.8 616.99 Transcription génétique ARN polymérase II Histones Protéines -- Modifications posttraductionnelles Cancer Immunologie Maturation post-traductionnelle des protéines Dans les cellules des eucaryotes, la transcription des gènes est contrôlée par une pléthore de complexes protéiniques. Cependant, la plupart de nos connaissances fondamentales sur la régulation de la transcription viennent des expériences biochimiques ou des expériences d’immunofluorescences utilisant des cellules fixées. Par conséquent, beaucoup d’efforts ont été consacré récemment pour obtenir des informations sur les mouvements dynamiques ou sur l’assemblage des facteurs de transcription directement dans des cellules vivantes. Nous avons développé une stratégie de marquage, appelé « versatile antibody-based imaging approach » (VANIMA), dans laquelle des anticorps marqués avec un fluorochrome sont introduit dans des cellules vivantes pour visualiser spécifiquement des protéines endogènes ou des modifications post-traductionnelle. Nous avons pu montrer que VANIMA peut être utilisé pour étudier des processus dynamique des mécanismes fondamental de la biologie y compris les facteurs de la machinerie de transcription ainsi que les modifications des histones dans des cellules vivantes de cancer humaine en utilisant la microscopie conventionnelle ou à super-résolution. Dans l’avenir VANIMA va servir comme un outil valable pour révéler les dynamiques des processus endogènes en biologie y compris la transcription directement dans des cellules vivantes individuelles. In eukaryotic cells, gene transcription is controlled by a plethora of protein complexes. However, most of our basic knowledge about transcription regulation originate from biochemical experiments or immunofluorescence experiments using fixed cells. Consequently, many efforts have been devoted recently to obtain information about the dynamic movements or assembly of transcription factors directly from living cells. Therefore, we developed a labeling strategy, named versatile antibody-based imaging approach (VANIMA), in which fluorescently labeled antibodies are introduced into living cells to image specific endogenous proteins or posttranslational modifications. We were able to show that VANIMA can be used to study dynamical processes of fundamental biological mechanisms including factors of the transcription machinery as well as histone modifications in living human cancer cells using conventional or super-resolution microscopy. Hence, in the future VANIMA will serve as a valuable tool to uncover the dynamics of endogenous biological processes including transcription directly in single living cells. Electronic Thesis or Dissertation Text en PDF 31098571 Université de Strasbourg Strasbourg 2019-12-31 https://theses.hal.science/tel-02917971 application/pdf 34772720 https://publication-theses.unistra.fr/public/theses_doctorat/2018/CONIC_Sascha_2018_ED414.pdf http://www.theses.fr/2018STRAJ081/abes https://theses.hal.science/tel-02917971 https://theses.hal.science/tel-02917971 https://theses.hal.science/tel-02917971 https://theses.hal.science/tel-02917971 Conic Sascha 1985-12-30 DE 237906406 https://theses.fr/2018STRAJ081 2018STRAJ081 https://doi.org/10.70675/707f76edz3165z4862z987az6066a94046e8 2018-09-27 Aspects moléculaires et cellulaires de la biologie Strasbourg 131056549 Doctorat Docteur es non oui Tora Laszlo MADS_DIRECTEUR_DE_THESE_1 069776113 Soutoglou Evi MADS_PRESIDENT_DU_JURY 17788312X Schermelleh Lothar MADS_MEMBRE_DU_JURY_1 237907240 Gebhardt Christof MADS_RAPPORTEUR_1 237906864 École doctorale des Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....) MADS_ECOLE_DOCTORALE_1 156502844 Institut de génétique et de biologie moléculaire et cellulaire (Strasbourg) MADS_PARTENAIRE_DE_RECHERCHE_1 155263749 93800 ddc:570 ddc:610 Tora Laszlo Soutoglou Evi Schermelleh Lothar Gebhardt Christof École doctorale Sciences de la vie et de la santé (Strasbourg ; 2000-....) Institut de génétique et de biologie moléculaire et cellulaire (Strasbourg) PDF 31098571 confidentialité 2018-09-27 2019-09-27 confidentialité 2018-09-27 2019-09-27 confidentialité 2018-09-27 2019-09-27 confidentialité 2018-09-27 2019-09-27